膀胱癌化学药物敏感性试验

【摘要】 目的：筛选膀胱癌化学治疗敏感性药物。方法：通过30例膀胱癌细胞原代培养，观察常用化学治疗药物的抑制率。结果：膀胱癌细胞对不同化学药物的敏感性不同（F＝3.4251，P<0.01），敏感性由高至低依次为：卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌、表阿霉素、5－氟尿嘧啶、吡柔比星、喜树碱、阿霉素、氨甲蝶呤、长春新碱；不同个体的癌细胞对同一药物的敏感性存在明显差异。结论：膀胱癌化学治疗首选卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌，建议以药物敏感性试验选药，实现治疗个体化方案。

【关键词】 膀胱癌； 化学药物； 细胞培养

　　Seitivity test of Anticancer Drugs for Bladder Cancer

　　YU Chun-hua， LI Jin-qing， GAO Dai-qing

　　(The 2nd Affiliated Hoital of Qingdao Medical College, Shandong Qingdao 266042, China)

　　Atract: Objective:To screen seitive anticancer drugs for bladder cancer. Method: 30 ecime resected were studied for the effect of 12 commonly used anticancer drugs on the cell growth inhibition by mea of primary tumor cell culture in vitro and MTT colorimetric aay. Result: The results showed that diversity of chemoseitivity was oerved in samples in different drugs(F=3.4251 , P<0.01);The chemoseitivity from high to low was Carboplatin(CAB)，Cilatin(DDP),Cyclophohamide(CTX),Mitomycin(MMC),Thiotepa(THI),Pharmorubicin(epi-ADM),Fluorouracil(5-FU),Pirarubicin(THP),Hydroxycamptothecine(OPT),Adriamycin(ADM),Methotrexate(MTX),Vincrestine(VCR)in tur different individual has different chemoseitivity for the same drug. Conclusion: CAB ，DDP，CTX，MMC，thiotepa are the first choice drugs for bladder cancer. We suggest that the selection of the drugs depend on chemoseitivity test，and chemotherapy of the bladder cancer should be individualized.

　　Key words： Bladder cancer； Anticancer drugs； Cell culture

　　膀胱癌化学药物治疗的疗效差异很大，原因在于肿瘤细胞对化学药物的敏感性不同。本试验应用膀胱癌细胞原代培养，并同时加入相应的化学药物，观察膀胱癌对常用化学药物的敏感性。现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料:膀胱癌30例，男性29例，女性1例。年龄35～88岁（平均66岁）。其中移行上皮癌26例，鳞癌2例，腺癌2例。癌组织取材为术中切下的或膀胱镜活检时钳取的癌组织。检材组织不少于2mm&time2mm&time2mm（取材过小，活细胞少，影响实验结果），立即放入含10％血清的1640组织培养液内，若不能立即实验，置4℃低温冰箱中保存。

　　1.2 药物：选膀胱癌化学治疗常用药物12种：卡铂、顺铂、丝裂霉素、5－氟尿嘧啶、噻替哌、环磷酰胺、阿霉素、表阿霉素、氨甲蝶呤、长春新碱、喜树碱、吡柔比星。按厂家提供的说明书的每公斤体重药量的1/80的量，以20μl含10％小牛血清的1640组织培养液稀释后加入培养孔中。

　　1.3 方 法

　　1.3.1 肿瘤组织以机械方法粉碎后，密度离心法分离出单个肿瘤细胞，调整细胞浓度为5～10&time104，肿瘤细胞移入含10％小牛血清的1640组织培养液中，置于5％二氧化碳孵箱内（恒温37℃）培养48h，培养液中含青、链霉素（分别为100IU/ml、100UG/ml）。设空白对照（小牛血清＋相应药物颜色的色素），实验对照（小牛血清＋肿瘤细胞），实验组（小牛血清＋肿瘤细胞＋化学药物）。

　　1.3.2 活肿瘤细胞染色。培养结束后，加入MTT（氮篮四唑盐）试剂20μl置恒温箱中染色2h，活肿瘤细胞被染成普蓝色，死亡的肿瘤细胞不着色。

　　1.3.3 测定吸光度（OD）值。染色结束后，在550nm处测定各孔吸光度值，仪器为DG5030型酶联免疫检测仪，计算化学药物对肿瘤细胞生长的抑制率（以空白对照孔仪器调零）。抑制率＝（（测定孔吸光度值－对照孔吸光度值）/对照孔吸光度值）100％。

　　1.3.4 统计学处理：采用方差分析进行检验。

　　2 结 果

　　30例膀胱癌的化学药物敏感性实验结果见表1。从表中可以看出，药物对膀胱肿瘤细胞抑制率，即膀胱癌细胞对化学药物敏感性由高至低依次为：卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌、表阿霉素、5－氟尿嘧啶、吡柔比星、喜树碱、阿霉素、氨甲蝶呤、长春新碱。统计分析表明，膀胱癌对不同化学药物的敏感性不同，差异具有显著性意义（F=3.4251，P<0.01），各药物间比较，卡铂与氨甲蝶呤、长春新碱间差别具有极显著性意义（P<0.01），顺铂与 长春新碱间差别亦具有极显著性意义(P<0.01)，环磷酰胺、丝裂霉素与长春新碱间差别具有显著性意义（P<0.05）。从表1中亦可看出，不同个体的癌细胞对同一种药物的敏感性存在明显差异。

　　3 讨 论

　　临床工作中常遇到同一种化学药物对分级分期相同的同一类型肿瘤的疗效相差很大，其原因与患者的一般状况、机体免疫状态有关，也与肿瘤细胞的内在特性有关，但目前无法揭示这些内在本质。另一方面，众多的化学药物，在肿瘤的治疗中选用哪种药物能收到良好的效果，是临床医师最为棘手问题，往往不得不据经验选药，或是试验性治疗，有一定的盲目性。本实验结果表明，在膀胱癌常用化学治疗药物中，同一膀胱癌个体对不同的化学药物敏感性不同，差异具有显著性意义。膀胱癌细胞对卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌较为敏感，可作为化学治疗首选药物，其次可选表阿霉素、5－氟尿嘧啶、吡柔比星、喜树碱、阿霉素，膀胱癌对氨甲蝶呤、长春新碱的敏感性较差。本实验结果还表明，不同膀胱癌个体对同一药物的敏感性存在明显差异，如在最敏感的卡铂组，抑制率最低为14％，属于化学药物不敏感组，而在敏感性最低的长春新碱、氨甲蝶呤组，抑制率高者达60％、98％，属于化学药物敏感组，其他各种化学药物均见类似情况。本组资料，由于例数少，对膀胱癌病理分级不同、细胞类型不同、临床分级不同时，化学药物敏感性有无差异，无法进行统计分析，亦不能确定首发癌与复发癌、单发癌与多发癌间对化学药物敏感性有无差异，尚需进一步证实。

　　表1 化学药物对膀胱癌细胞的抑制率（略）

　　据本实验结果，我们建议：①膀胱癌行化学治疗前，先取肿瘤组织（经膀胱镜或开放手术获取）作培养，进行药物敏感性实验，依实验结果选取敏感性药物。②无条件进行化学药物敏感性实验时，则化学治疗首选卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌，其次可选表阿霉素、5－氟尿嘧啶、吡柔比星、喜树碱、阿霉素。③在同一类药物中，如卡铂和顺铂，吡柔比星、表阿霉素和阿霉素，因药物敏感性相近，依据病人经济状况选取药物，既达到治疗目的，又不使病人经济负担过重。

【参考文献】
　　［1］ 那彦群，宋毅，俞莉章．不同个体表浅性膀胱癌灌注化疗药物敏感性的研究［Ｊ］．中华泌尿外科杂志，1997，10：607-610．

　　［2］ 周建军，乐秀芳，韩家娴，等．影响MTT方法测定结果的一些因素［Ｊ］．肿瘤，1994，3：93-93．

　　［3］ 李翠玲，崔正言，李淑贞．MTT比色分析法的改良及初步应用［Ｊ］．上海免疫学杂志，1996，5：306-307．