膀胱癌患者体液中血管内皮生长因子含量检测

【摘要】 目的 测定膀胱癌患者血液和尿液中血管内皮生长因子（VEGF）的含量。方法 采用免疫组化ELISA法检测60例膀胱癌患者及30例健康志愿者体液中VEGF的表达。结果 膀胱癌组血液和尿液中VEGF含量明显高于对照组（P＜0?001和P＜0?005）。结论 膀胱癌患者VEGF水平增高有可能成为一种新的肿瘤标志物而用于膀胱癌的早期诊断及病情进展的动态监测指标。

【关键词】 膀胱癌；血管内皮生长因子；体液

　　膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤。膀胱镜和尿脱落细胞检查被广泛认为是诊断膀胱癌的“金标准”。但膀胱镜检属于有创检查，尿脱落细胞检查敏感度低〔1，2〕。因此，寻找理想，无创的膀胱癌标志物一直是膀胱癌诊断研究的热点。近期发现的血管内皮生长因子（VEGF）是一种与肿瘤发生发展密切相关的促肿瘤血管形成诱导因子。目前对膀胱癌组织中VEGF的表达已有较多研究〔3〕，但对膀胱癌患者体液VEGF的研究尚少，特别是迄今尚未见到同时检测膀胱癌患者血液和尿液中VEGF含量的文献报道。本研究旨在评价VEGF含量作为膀胱癌诊断标记物的价值。

　　1 资料与方法

　　1?1 临床资料 膀胱癌患者60例，均为手术和病理证实的本院住院患者，男41例，女19例，年龄43～87岁。临床分期按UICC标准：Ⅰ期31例，Ⅱ期18例，Ⅲ期9例，Ⅳ期2例。细胞分级按WHO标准：G125例，G227例，G38例。健康对照组选自年龄，性别相匹配的30例志愿者，其中男42例，女8例，年龄41～79岁。

　　1?2 标本采集及处理 血液标本：空腹抽取外周静脉血2 ml，500 r/min，离心10 min，分离血清，置于-20℃冷藏，测定前20 min取出平衡至室温。尿液标本：收集清晨中段尿10 ml，离心后取上清液-20 ℃贮存待检。对照组血和尿标本均按上述方法提取并保存。

　　1?3 检测方法 血液标本采用ELISA法检测VEGF含量。人VEGF ELISA试剂盒（购自深圳晶美生物工程公司），最小可测VEGF达30 pg/ml，检测步骤按试剂盒说明书进行。采用美国BIORAD550型酶标仪测定，在450 nm处读取OD值，测定值按标准曲线换算成VEGF含量（pg/ml）。尿液标本中VEGF含量采用人VEGFELISA试剂盒（北京邦定泰克生物技术公司）的双抗体夹心ELISA法，加入生物素标记的抗人VEGF，与单抗上的人VEGF结合形成免疫复合物，辣根过氧化物酶标记的亲和素与生物素结合。加入显色剂，在450 nm上测吸光度A值，根据标准曲线计算标本中VEGF含量。

　　1?4 统计学方法 采用方差分析比较和t检验。

　　2 结果

　　膀胱癌患者血清中VEGF水平为（201?57lusm157?26）pg/ml，明显高于正常对照组（53?17lusm23?68）pg/ml。两组相比差异显著（P＜0?001），膀胱癌患者尿液VEGF浓度为（198?57lusm124?69）pg/ml，正常对照组为（4?71lusm3?65）pg/ml，两组比较差别具有统计学意义（P＜0?005）。结果同时提示， VEGF水平与患者年龄及性别无相关性，但与临床分期及细胞分级呈正相关，即VEGF水平随膀胱癌临床分期和癌细胞分级增高而上调。

　　3 讨论

　　肿瘤发生时，瘤体及瘤周将会发生持续的、失控的血管生成；恶性肿瘤的发生发展及转移的各个阶段均有赖于新生血管的形成〔4〕。膀胱癌亦属于典型的血管依赖性疾病。目前的研究表明，VEGF是肿瘤组织中促血管生长敏感性强，特异性高的最重要的促血管生长因子，其他血管生长因子大都通过增强VEGF的表达来产生肿瘤血管的生成作用〔5〕。故深入探讨VEGF在膀胱癌发生发展及诊断中的作用，对于目前膀胱癌患者的研究治疗带来突破性进展具有极其重要的指导意义。

　　本组60例膀胱癌患者体液中VEGF含量均值与非肿瘤对照组的30例相比均显著增高，这可能与膀胱肿瘤直接接触尿液和肿瘤细胞大量产生的VEGF入血有关。此外还发现尿液和血液中VEGF水平随临床膀胱癌分期和肿瘤细胞分级升高而上调，这表明，测定患者体液中VEGF含量可以反映肿瘤状况。Streeter等〔6〕也有类似发现，认为体液中VEGF含量在一定程度上反映膀胱肿瘤的生物学行为，可作为膀胱癌早期无创诊断和检测的指标，具有进一步研究的价值。

　　敏感度与特异性是选择膀胱肿瘤标志物的重要条件，但在临床实际应用中必须考虑到标志物检测方法的可行性。本研究采用临床广泛应用且技术成熟的免疫组化法分别对60例膀胱癌患者和30例健康志愿者体液中VEGF含量进行检测，结果表明，膀胱癌组均有不同程度的表达，而对照组无一例表达或表达极弱。提示同步检测血液和尿液中VEGF含量能为膀胱癌的诊断提供一种敏感度高，特异性强的无创性辅助方法。但由于本研究的标本量有限，要证实其确切的临床实际应用价值，尚需进一步扩大研究范围并增加标本量。

【参考文献】
　　1 Brown FM?Urine cytology?Is it still the glod standard for screening〔J〕? Urol Clin North Am，2000；27(1):25?37?

　　2 Glas AS， Roos D?Tumor markers in the diagnosis of primary bladder cancer A systematic review〔J〕?J Urol,2003；169(6): 1975?82?

　　3 Stavropoulos NE，Bouropoulos C，Ioachim IE，et al?Prognostic significance of angiogenesis in superficial bladder cancer〔J〕?Int Urol Nephrol,2004；36(2):163?7?

　　4 Los M,Voest EE?EGF as a target of therapy in gastrointestinal oncology〔J〕?Digsurg，2005；22(4):283?91?

　　5 Parikh AA，Ellis LM?The vascular endothelial growth factor family and its receptor〔J〕?Hematol Oncol Clin North Am,2004；18(5):951?7?

　　6 Streeter EH，Harris AL?Angiogenesis in bladder cancerprognostic maker and target for future therapy〔J〕?Surg Oncol,2002；11：85?97?